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實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在衛(wèi)生應(yīng)急中的應(yīng)用

更新時(shí)間:2020-03-16點(diǎn)擊次數(shù):1775

 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡(jiǎn)稱Real Time PCR,如果用于RNA檢測(cè),這被稱為逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)PCRReal-time RT-PCR)是實(shí)時(shí)PCR法,它是指對(duì)DNA或經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)入(RT-PCR)的RNA通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)并實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的放大過(guò)程,在擴(kuò)增的指數(shù)增長(zhǎng)期就測(cè)量擴(kuò)增產(chǎn)物,因?yàn)閿U(kuò)增指數(shù)增長(zhǎng)期測(cè)量值與特異DNARNA)起始量存在相關(guān)性,從而實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。

Real Time PCR的基本目標(biāo)是測(cè)量和鑒別非常微量的特異性核酸,從而可通過(guò)監(jiān)測(cè)CT值而實(shí)現(xiàn)對(duì)原始目標(biāo)基因的含量定量。目前被普遍使用的多種常規(guī)PCR方法如各種凝膠電泳PCR法,終點(diǎn)熒光定量法或PCR-ELISA法叫做終點(diǎn)PCR法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法大的點(diǎn)是克服了終點(diǎn)PCR法進(jìn)入平臺(tái)期或叫飽和期后定量的較大誤差,實(shí)現(xiàn)DNA/RNA的定量。

普通PCR技術(shù)發(fā)明于1983年,而實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)發(fā)明于上世紀(jì)九十年代并于1996年生產(chǎn)出了上第臺(tái)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)的技術(shù)要素主要有熒光定量PCR試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,我熒光定量PCR試劑盒研發(fā)實(shí)力強(qiáng)大,生產(chǎn)廠較多,臨床診斷的品種如HBV/HCV及禽流感診斷試劑盒性能良、供應(yīng)充足,基本實(shí)現(xiàn)產(chǎn)化。在豬流感病毒RNA核酸序列明確的情況下,利用現(xiàn)有的試劑研發(fā)平臺(tái),人感染豬流感實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷試劑盒很快就會(huì)面世。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀由于技術(shù)含量,只有少數(shù)幾中企業(yè)有能力生產(chǎn)如西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL-988系列儀器不但取得了發(fā)明、科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)、重點(diǎn)新產(chǎn)品證書(shū)、醫(yī)療器械注冊(cè)證,而且被發(fā)改委確立為技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程2008年生物醫(yī)學(xué)工程專項(xiàng),產(chǎn)品性能達(dá)到際*水平,在乳品檢測(cè)行業(yè)*比進(jìn)口儀器還[1-3]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀應(yīng)用廣泛,1999年開(kāi)始,西方發(fā)達(dá)嘗試將PCR應(yīng)用于臨床傳染病診斷、食品安全檢測(cè)以及血液篩查,目前已相當(dāng)普及。20081213日中衛(wèi)生部下發(fā)《衛(wèi)生應(yīng)急隊(duì)伍裝備參考目錄》(衛(wèi)辦應(yīng)急發(fā)[2008]207號(hào)),其中要求縣以上衛(wèi)生應(yīng)急隊(duì)伍建設(shè)中必須配備PCR儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀作為傳染病控制類裝備。

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